一种酶解法高纯度III型胶原提取工艺方法

胶原是具有三螺旋结构的天然生物高分子，是动物体内含量最丰富的蛋白质，哺乳动物身上所有蛋白质中约30％是胶原蛋白。胶原蛋白广泛分布于人体各组织器官中，以结缔组织中含量最高。由于它是机体内多种组织的主要组成成分，起到细胞和组织结构的支架作用，对细胞和组织的形态结构、新陈代谢、生长和分化等均有重要的影响。胶原由3条链组成，每条肽链约1000个氨基酸残基，根据其每条链的氨基酸组成差异，胶原可分为多种类型，目前在哺乳动物体内已发现27种不同类型的胶原，不同类型胶原的性质存在一定差异。III型胶原，是一种重要的纤维形成胶原，约占人体内整体胶原含量的5-20％。III型胶原是抗弹性的空腔器官如血管，子宫和肠道的一种重要的结构成分，也在其他组织中与I型胶原结合出现，如乳皮。软骨中发现的大多数III胶原分子并没有完全加工，而且含有结合N末端前肽的二硫键。III型胶原为很多组织提供弹性及完整性，但是据报道它还有其他功能。1975年，最早的关于III型胶原的研究显示它影响人类血小板聚集，溴化氰处理的小牛皮肤III型胶原产生的一种肽可促进人血液中的血小板粘附。1979年Balleisen证实血小板聚集能够通过将抗体涂布到直接作用的I,II,III型胶原纤维上而被抑制，从而阻止了胶原与血小板的直接物理接触。1993年，Chiang等从血小板中分离出一个47kDa膜蛋白并证明它与III型胶原相互作用。现在已知血小板通过特定的糖蛋白和非整合素受体与III型胶原相互作用(Monnet和Fauvel-Lafeve,2000)。III型胶原还通过与细胞表面受体整合素的相互作用，在细胞粘附，迁移，增殖以及分化中发挥作用。此外，通过对手术后的患者的伤口、腹膜和血清中收集的液体的检测，III型前胶原(PIIINP)的N端前肽水平在术后2-3天增加(Haukipuroet al.，1987)。术后第5天，手术患者的PIIINP水平是非手术患者的1000倍。这些发现说明III型胶原蛋白是伤口愈合所必需的。在组织再生材料方面，I型和III型胶原对于膀胱壁的无细胞基质的移植和再生效果影响十分显著。由于胶原在天然状态下不溶于水溶液，直接分离不同类型的胶原存在一定难度，也是近年来的生物材料领域中胶原研究的热点。不同类型胶原的热变性温度存在一定差异，热变性后的胶原可通过非胶原类的酶进行降解。因此，通过温度控制可实现不同类型胶原的变性，加入酶后可实现不同类型胶原的选择性酶解，是实现分离不同类型胶原的一种良好方法。

华炬科技新产品研究所技术咨询委员会科研人员现推荐一项一种酶解法高纯度III型胶原提取工艺方法，该技术的一种III型胶原的提取方法具有操作简便，工艺条件对仪器设备的依赖性较低，易于实现的优点，并且该方法制备出的III型胶原纯度高，分子量大，可作为一种理想的生物材料，用于组织工程、医疗器械、组织修复、药物控释和动物细胞培养等领域，现将该一种酶解法高纯度III型胶原提取工艺方法及技术方案及实施例介绍如下供研究交流参考：（311211  346249）